AFDye 647 NHS ester 細(xì)胞染色
簡要描述：
AFDye 647 NHS ester 細(xì)胞染色Dye 647是一種水溶性、強光穩(wěn)定性的染料，具非常高的光量子產(chǎn)量。AFDye 647是一種明亮的遠(yuǎn)紅外熒光染料，可使用633nm或647nm激光譜線進(jìn)行激發(fā)。
產(chǎn)品時間：2025-12-02
打印當(dāng)前頁AFDye 647 NHS ester
(Alexa Fluor 647 NHS ester Equivalent)
產(chǎn)品信息
產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品編號 | 規(guī)格 | 價格（元） | 促xiao價（元） |
AFDye 647 NHS ester (Alexa Fluor 647 NHS ester Equivalent)r | MX6024-1MG | 1mg | 1100 | 950 |
AFDye 647 NHS ester (Alexa Fluor 647 NHS ester Equivalent) | MX6024-5MG | 5mg | 2300 | 1950 |
產(chǎn)品描述
Dye 647是一種水溶性、強光穩(wěn)定性的染料，具非常高的光量子產(chǎn)量。AFDye 647是一種明亮的遠(yuǎn)紅外熒光染料，可使用633nm或647nm激光譜線進(jìn)行激發(fā)。適用于對低豐度靶標(biāo)進(jìn)行成像，尤其在固定細(xì)胞中。在pH 4-10范圍內(nèi)耐受性強。
AFDye647 NHS ester (Equivalent toAlexa Fluor 647 NHS ester）是一種胺反應(yīng)、發(fā)遠(yuǎn)紅外熒光的染料，通常通過伯胺來標(biāo)記蛋白或抗體、多肽、胺基修飾的寡核苷酸，以及其它含胺基生物分子。這一標(biāo)記通常在pH 7-9范圍zui有效，形成穩(wěn)定和共價酰胺鍵。
產(chǎn)品特性
同義名：AFDye 647 Succinimidyl Ester; AFDye 647琥珀酰亞胺酯； | 純度：≥95% |
激光譜線：633nm或647nm | 外觀：固體 |
溶解性：溶于水，DMF，DMSO | |
摩爾吸光系數(shù)：239,000 cm-1M-1 | A280/Amax：3% |
光譜相似染料：Alexa Fluor® 647, DyLight® 649, Cy5 | 常用濾光片組：Cy5 |
保存與運輸方法
保存：-20oC避光干燥保存，2年有效。
運輸：冰袋運輸。
注意事項
1） 熒光染料均存在淬滅問題，請盡量注意避光，以減緩熒光淬滅。
2） AFDye NHS ester系列染料雖有一定的水溶性，但，強烈推薦用DMSO、DMF溶解配制母液，再進(jìn)行后續(xù)的標(biāo)記實驗。因為，在水溶性體系中這些反應(yīng)性基團非常容易被水解生成非反應(yīng)性的游離酸形式。
3） 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
一、染色步驟（以免疫球蛋白IgG的標(biāo)記為例）
幾乎所有蛋白或多肽都能用胺反應(yīng)試劑（探針）來標(biāo)記。以下是針對IgG抗體而優(yōu)化的標(biāo)記步驟，用戶可根據(jù)自身蛋白量來放大或縮小反應(yīng)體系，但為了得到理想的染色結(jié)果，蛋白濃度不得小于2mg/ml。由于不同蛋白（多肽）所含胺基數(shù)目、胺基表面位置都有巨大差別，建議用戶在初次實驗時，建立三組不同的胺反應(yīng)試劑：蛋白的摩爾比，以篩選出能達(dá)到zuijia標(biāo)記效率的摩爾比。
1.1 于1ml 0.1M碳suan氫鈉緩沖液充分溶解~10mg蛋白。
注① ：蛋白濃度通常為5-20mg/ml，偶聯(lián)的成功率對蛋白濃度具高度依賴性。當(dāng)濃度低于2 mg/ml，會嚴(yán)重影響標(biāo)記效率。
注② ：標(biāo)記體系應(yīng)避免任何含胺基底物，如Tris、glycine、銨鹽、或其他穩(wěn)定蛋白如BSA等，如待標(biāo)記的蛋白溶液中含有上述物質(zhì)的污染，則需透析到10-20 mM的磷酸鹽緩沖液（PBS）中，再向每ml蛋白溶液中加入0.1 ml 1M碳酸氫鹽緩沖液（pH 8.3–9.0）調(diào)至所需pH值。
注③ ：抗體溶液中存在的低濃度疊氮鈉（＜3 mM）或硫汞撒（＜1 mM）不會干擾標(biāo)記反應(yīng)。
1.2 用高質(zhì)量無水DMF或DMSO溶解胺反應(yīng)試劑（探針）（比如：AFDye647 NHS ester）至10 mg/ml。
注①：AFDye 488 NHS ester的水溶液務(wù)必現(xiàn)配現(xiàn)用，不可保存，因其在水溶液中，會被水解成非活性游離酸。AFDye 488 NHS ester的DMSO儲存液可置于≤-20℃保存，建議2周內(nèi)用完。
1.3 一邊攪拌或渦旋蛋白溶液，一邊緩慢加入50-100 µl 胺反應(yīng)試劑（探針）。
注①：加入胺反應(yīng)試劑（探針）的量在0.5-1 mg，總的來說，約1/4-1/3的胺反應(yīng)試劑會偶聯(lián)到蛋白上。不同的蛋白和標(biāo)記試劑的標(biāo)記效果不同，請根據(jù)具體情況優(yōu)化兩者比例。
1.4于室溫緩慢攪拌避光孵育1h（或更長）。
1.5【可選】通過加0.1ml新鮮配制的1.5M羥胺（pH 8.5）來終止反應(yīng)，于室溫孵育含羥胺體系1h。
1.6純化：選擇一種合適的方式（比如：透析法、P-30柱子或PD-10柱）來純化標(biāo)記產(chǎn)物，去除鹽離子或未反應(yīng)的胺反應(yīng)試劑。
1.7貯存：標(biāo)記好的蛋白避光保存于2-8℃。若純化的蛋白偶聯(lián)物濃度＜1mg/ml，加入BSA或其它穩(wěn)定蛋白1-10mg/ml。在2mM疊氮鈉存在的情況下，2-8℃可保存幾個月。若需保存更長時間，需分裝后于-20℃避光保存，避免反復(fù)凍融。
二、計算標(biāo)記比例（F/P值）
對于免疫球蛋白IgG等大多數(shù)抗體來說，摩爾吸光系數(shù)為203000，F(xiàn)/P值在4～9之間是最合適。
2.1AFDye647標(biāo)記蛋白F/P值計算：
1）用PBS精確倍數(shù)稀釋定量的少許純化過的偶聯(lián)蛋白，在1cm比色皿中測定280nm和650nm的光吸收；
2）計算樣品中的蛋白濃度：蛋白摩爾濃度=(A280-(A650×0.03))×稀釋倍數(shù)/203000
3）計算標(biāo)記比例：每摩爾蛋白結(jié)合的染料摩爾數(shù)=A650×稀釋倍數(shù)/(239000×蛋白摩爾濃度)
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— —Written/Edited by V. Shallan【版權(quán)歸MKBio懋康所有】
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